Идентификация и определение количества клеток BD Elispot

Преимущества метода

Выработка цитокинов определяется на уровне каждой отдельной клетки, позволяя определять частоту цитокин-продуцирующих клеток. Метод ELISPOT более чувствительный, чем ELISA.

ELISPOT способен выявлять 1 цитокин-продуцирующую клетку из 300 000 клеток популяции.

В отличие от метода ELISA с помощью метода ELISPOT исследуются живые клетки, а не биологические жидкости. Объективный и быстрый анализ количества циткин-продуцирующих клеток (spots – точки) и относительного количества цитокина на клетку (spot size – размер точки). BD™ ELISPOT - широкий спектр тест-систем для количественного определения цитокинов в различных биологических жидкостях человека и животных.

Три варианта реагентов BD™ ELISPOT

BD™ ELISPOT Kits - полностью готовые к использованию наборы, содержащие все необходимые компоненты.

Состав наборов:

• 2 планшета ImmunoSpot® ELISPOT с нанесенными первичными антителами
• Вторичные биотинилированные антитела
• Конъюгат стрептавидина-пероксидазы
• AEC субстрат/Хромоген
• Разбавитель для образцов
• Буфер для промывания планшет
• Концентрат PBS

BD ELISPOT Sets - наборы, предназначенные для проведения исследований большого количества образцов. В состав наборов входят реагенты, достаточные для постановки реакции в десяти 96-планшетах.

Состав наборов:

• Первичные антитела (Capture)
• Вторичные антитела (Detection)
• Конъюгат стрептавидина-пероксидазы

BD ELISPOT Reagent Pairs (Пары антител) – антитела, достаточные для постановки реакции в десяти

Состав наборов:

• Первичные антитела (Capture, формат NA/LE), для 5 планшет
• Вторичные биотинилированные антитела (Detection)

Методика постановки реакции (с использованием BD™ Elispot)

1. Первичные антитела

Для форматов Sets и Pairs: покрыть микропланшеты первичными антителами к соответствующему цитокину. Для наборов формата ELISPOT Kit: перейти к этапу 3.

2. Блокирование

Блокировать несвязанные сайты с помощью протеина.

3. Добавить клетки

Инкубировать клетки в лунках с антигеном, митогеном и т.п.

4. Отмыть

Удалить клетки.

5. Вторичные антитела

Добавить биотинилированные вторичные анти-цитокиновые антитела.

6. Фермент-авидин.

Добавить стрептавидин-Пероксидазу.

7. Инкубировать с субстратом

Добавить субстрат и контролировать формирование окрашенных точек.

8. Анализировать с помощью светового мироскопа

или специализированного прибора Immunospot® Series I Analyzer (CTL Analyzers LLC).